硫磺素T (Thioflavin T，ThT) 是一種苯并噻唑鹽類的陽離子熒光染料。它最初在紡織業中用作染料，后因其在生命科學與醫學研究中的獨特-價值而備受關注——作為一種高度特異性的熒光探針，ThT可在與淀粉樣蛋白原纖維結合后熒光增強。因而常被用于檢測堆疊的β折疊聚集體。
ThT的工作原理基于其與淀粉蛋白原纖維結合后熒光特性的顯著變化。
● 游離狀態 (未結合)：
• 在水溶液中自由存在的ThT分子，其熒光非常微弱，量子產率很低。
• 最大激發/發射波長：約為~385nm/~445nm
● 結合狀態 (與淀粉樣原纖維結合)：
• 當ThT與富含β-折疊 (cross-β-sheet) 結構的淀粉樣纖維結合時，其分子內旋轉受到限制，從非輻射衰變轉變為輻射衰變。
• 這一過程導致其熒光強度急劇增強(通常可達100-1000倍)，并且其最大發射波長發生紅移。
• 結合后的最大激發/發射波長：通常為~450nm/~482nm。
這種熒光強度的巨大變化與淀粉樣原纖維的數量成正比，從而實現了對纖維化過程的實時、定量監測。
• 產品貨號：32553
• Cas No.:2390-54-7
• 分子式: C17H19N2S•Cl
• 分子量: 318.9
• 純度: ≥90%
• 發射波長: 445, 482 nm 激發波長: 385, 450nm
• 產品形式: 晶體狀固體
• 溶解度: DMF: 1mg/ml DMSO: 1mg/ml Ethanol: 1mg/ml PBS (pH 7.2): 輕微溶解
• Ethanol: PBS (pH 7.2) (1:3): 0.3mg/ml
• λmax: 417nm
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| Thioflavin T | 32553 | 10g/25g/50g/100g |
具體步驟如下：
1??. 使用dH2O制備1mM的硫黃素T儲備液 (需現配現用，并用2µm注射式過濾器過濾)；
2??. 使用pH7.4的PBS對硫磺素T儲備液進行稀釋，最終濃度為25µM(每孔體積100µL)；
3??. 室溫下解凍α-突觸核蛋白/Tau蛋白樣品；
4??. 將10μM α-突觸核蛋白/Tau蛋白原纖維或100μM單體(或兩者混合)加入到合適的板孔中。用移液器上下混合均勻。
注：該濃度是估計值，具體實驗需要進行優化以獲得較理想的實驗結果，且不會造成樣本的浪費。
5??. 對板孔進行密封并放置于震蕩孵育器上(800rpm)，溫度為37℃；
6??. 使用全波長熒光型酶標儀讀取熒光讀數。
7??. 再次將孔板密封放置于震蕩孵育器上, 溫度為37℃。
8??. 在1到72小時之間的固定間隔進行讀值。
• 溫度：37°C
• 讀取類型：全孔掃描
• 波長：發射波長450nm 激發波長485nm
• PMT Gain：自動
• 每次讀取閃爍：6
• 震動：讀數前 20秒
注：以上操作步驟引自StressMarq品牌上對α-突觸核蛋白及Tau蛋白硫磺素T檢測。廠家原網-址鏈接為：Alpha Synuclein Thioflavin T Assay Protocol | StressMarq
StressMarq 公司介紹
StressMarq Biosciences成立于2007年, 總部位于加拿大維多利亞市, 是一家專業的生物試劑供應商。其在開發和商業化一系列預制原纖維、寡聚體和單體蛋白方面處于領-先地位, 這些蛋白對于神經退行性疾病(阿爾茨海默病、帕金森病等)的研究至關重要, 包括：α-突觸核蛋白(alpha synuclein)、Tau蛋白、β淀粉樣蛋白(amyloid beta)和超氧化物歧化酶1(SOD1)等。StressMarq的產品范圍還涵蓋多種抗體、試劑盒、小分子以及其他類型蛋白質。這些產品被廣泛應用于神經科學、癌癥研究及細胞信號傳導等多個生命科學領域,為各類科學研究提供了全面支持。
● 蛋白：專注于開發與神經退行性疾病密切相關的特色產品，涵蓋α-突觸核蛋白、Tau蛋白和β-淀粉樣蛋白的預制原纖維、寡聚體及單體結構
● 抗體：數百種與細胞信號傳導、神經科學、癌癥和心血管系統相關的高品質單克隆和多克隆抗體
● 試劑盒：涉及細胞信號和氧化應激等領域，如DNA Damage (8-OHdG) ELISA Kit
● 小分子：涉及癌癥和神經科學領域300余種抑制劑、拮抗劑、激動劑、激活劑和配體
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